一、组织培养的步骤?
植物组织培养的流程:
第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。
第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1~2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3~10次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08~0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。
二、植物组织培养说明了什么,植物组织培养的意义?
通过组织培养得到的植物体的特点:组织培养得到的植物体的遗传物质与原植物体的遗传物质完全相同,表现出的性状完全一样(排除基因突变等情况)。需要注意的是如果用亲本的花粉进行组织培养,那么得到的植株会是单倍体,单倍体的遗传物质自然也就比用体细胞培养的植株的遗传物质减少一半。植物组织培养的实质是:基因的选择性表达。
三、草莓组织培养?
组织培养技术 1.培养程序和培养基 5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖,大小为0.3--0.4mm,作为组织培养的外植体。
用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS,附加6--BA0.5mg/L,NAA0.2mg/L,蔗糖30g/L,琼脂粉6.5g/L,pH值调至5.8--6.0。在草莓茎尖的扩大繁殖阶段,采用MS培养基附加6-BA0.5mg/L、NAA0.01mg/L。扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块,转入继代培养基。在转苗过程中,去掉原生叶片有利于新苗分化,在扩大繁殖中随时清除愈伤组织,有利于新苗增殖和生长。诱导生根培养基用1/2MS附加不同浓度IBA。试验表明:以IBA0.1mg/L的浓度处理的生根率最高,为100%,平均根条数为2.4条。不加IBA及IBA浓度超过0.2mg/L,多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织,随后在愈伤组织上分化生根,致使成活率大大降低。2.操作技术要点及培养条件 (1)灭菌与接种 预处理 为了灭菌彻底,常把接种材料先进行湿润处理,使灭菌剂能顺利地渗入材料。可用多种湿润剂,我们采用的是75%的酒精,湿润的时间为半分钟至1分钟。灭菌处理 在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%),浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉),用其饱和上清液,浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20分钟;新洁尔灭5--10%水溶液,浸泡10--15分钟;升汞0.1%水溶液,浸泡8--10分钟。其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全,但因灭菌时间较长,常常使接种材料的外层氧化变褐,以致影响培养效果。升汞有很强的杀菌能力,但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。因此,在草莓组织培养中,如把握好时间,升汞是应用较多的灭菌剂。灭菌后的接种材料,要用无菌水充分清洗,通常要换水3--5次。接种 以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养,所接种的茎尖材料很小,在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点,并使用固体培养基比较适宜,接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。培养基须用1--1.1大气压热压灭菌20分钟。从材料接种到生根苗长成,这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃。每日光照12小时,光强发2000Lx为宜。培养室温度在18--26℃范围内,瓶苗可以正常生长及发根,但在28℃以上时,绿苗普遍变黄,生根率降低,根尖发黄老化,幼苗易产生玻璃化现象。组培苗的移栽技术 1.移栽技术 试管苗的苗龄为15天,主根长1.5cm左右,白色无须根,移栽成活率可达90%--100%。移栽前要将培养瓶从培养室中取出置于自然条件下,打开瓶盖进行透气锻炼。24小时后,从瓶中取出幼苗,清除干净根部及根颈处的培养基,栽入苗圃或穴盘中进行驯化。基质可采用经过灭菌处理的腐熟的锯木屑或腐叶土,也可采用经过灭菌处理的由蛭石与珍珠岩按体积计以1:1比例配成的混合物,或园土与煤渣按体积计以2:1比例配制成的混合物。2.提高移栽成活率的关键 选择不定根直接生自茎基,根多且粗壮,叶片在3片以上,叶大、厚、深绿的生根苗,成活率普遍较高。栽培基质要用清水冲洗干净,或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌,用煤渣作基质时,还要用0.2%冰乙酸中和使碱性降低。移栽时采取“深栽浅埋”。深栽就是在移栽时根要栽得深,浅埋的标准是使小苗的根颈与土表平齐,或略高于土表。注意控制光照与温度、湿度。小苗移栽后,放在温室内或塑料拱棚内培养,温度控制在15--20℃,湿度维持在80%左右为宜。同时由于刚移栽的小苗茎杆脆嫩,应尽量采用喷雾状浇水,水量也不宜过大,落干后再喷。遮光50%,一周后,可逐渐增强日光照射。四、组织培养原理?
植物组织培养即植物无菌培养技术,又称离体培养,是根据植物细胞具有全能性的理论,利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后形成完整的植株的学科。
五、游戏《坦克世界》中的霞飞成员应该培养什么技能?
做为LT,隐蔽技能是必不可少的。当首个技能到达100%的时候,将车长技能改为第六感。车长第二技能隐蔽。其它成员技能以加强侦查或者增强机动为优先。配件方面看个人风格。伪装网是必不可少的,炮队镜或者高光增加视野,第三个配件选通风或者垂稳或者输蛋都可以。
六、植物组织培养的培养基类型?
按照物理性质,植物组织培养基主要分为液体培养基,半固体培养基,固体培养基三种类型。
七、动物组织培养的意义?
动物细胞工程的基础是动物的组织培养。动物组织培养的奠基人是美国生物学家哈里森。哈里森在1907年从蝌蚪的脊索中分离出神经组织,并把分离出来的神经组织“种植”在事先涂有蛙体淋巴的盖玻片上。
种植时淋巴已凝固,然后把盖玻片倒放在另一块特制的凹玻片上,再在盖玻片周围用蜡封固。
蝌蚪的神经组织在这种条件下居然能活好几周,开创了动物组织培养的先河,哈里森也因此被世界科学界公推为动物组织培养的开山鼻祖。动物组织培养技术,是从动物体内取出组织,模拟体内的生理环境,在无菌、适温和丰富的营养条件下,使离体组织生存、生长并维持结构和功能。
八、植物组织培养的背景?
发展简史 1839年德国学者T.A.H.施万就指出,如果提供适宜的外界条件,多细胞有机体的每一个细胞都能独立地发育。1901年美国遗传学家T.H.摩尔根第一次用全能性一词来表示生物细胞独立发育的能力。植物细胞全能性是指植物细胞在离开机体后可以在适宜条件下再生为完整的植株。1934年美国学者P.R.怀特第一次实现了离体根在人工培养液中的无限生长。1946年中国学者罗士韦培养菟丝子茎尖并观察到花的形成。20世纪50年代法国R.H.韦特莫尔和G.莫雷尔从只带有1~2个叶原基的茎尖获得再生的无病毒植株,并将这一方法用于经济植物的快速繁殖。1939年P.R.怀特和法国学者R.J.戈特雷分别从胡萝卜和烟草的形成层组织,诱导出一种设有特定形态结构和功能的组织,即愈伤组织,并发现生长素(吲哚乙酸)是诱导愈伤组织形成和维持其连续生长的关键因素。以后植物组织培养学家的注意力便集中于如何控制愈伤组织的器官发生和胚胎发生。
九、动物组织培养的条件?
①无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理.通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染.此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害.
②营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等.通常需加入血清、血浆等天然成分.
③温度:适宜温度:哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;pH:7.2~7.4.
④气体环境:95%空气+5%CO2.O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH
十、动物组织培养的原理?
1、动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.
2、细胞的接触抑制:细胞表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖.
3、癌细胞表面糖蛋白减少,因此黏着性降低.
4、细胞膜可以让水分子自由通过,细胞要选择吸收的离子和小分子也可以通过,而其他的离子、小分子和大分子则不能通过,因此细胞膜是一种选择透过性膜.
5、有丝分裂记忆口诀:前期:膜仁消失现两体,中期:形定数晰赤道齐,后期:点裂体增均两极,末期:两消两现重开始.
(1)动物细胞培养的原理细胞增殖,目的是获得细胞或者细胞产物.
(2)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触性抑制.
(3)细胞发生癌变后,细胞间的黏着性降低,与细胞膜表面糖蛋白含量减少有关.
(4)活细胞膜具有选择透过性,大分子不能通过,而给染色体染色的染料是大分子,所以应是死细胞.
(5)有丝分裂中期时染色体的着丝粒排列在赤道板上,染色体形态固定、数目清晰,是观察染色体数目的最佳时期.